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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 | | |
一、介紹
豬藍(lán)耳病毒PCR核酸檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR反應(yīng),具有廣泛的用途。
細(xì)胞炎癥因子檢測試劑盒的主要組成部分包括特異性抗體、酶標(biāo)記物、底物、標(biāo)準(zhǔn)品和其他輔助試劑。這些試劑共同作用,使得細(xì)胞因子能夠被特異性地捕獲、識別和定量。
1. 方便,用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)。
2. 快捷,操作步驟已經(jīng)限度地簡化,能減少污染,降低實(shí)驗(yàn)誤差。
3. 本產(chǎn)品A型含電泳染料,PCR反應(yīng)液可直接上樣電泳,進(jìn)一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,反應(yīng)的靈敏度高,特異性強(qiáng)。能擴(kuò)增各種常見的DNA樣品。
5. 產(chǎn)物可直接用于T載體克隆,不需要額外的加A反應(yīng)。
使用及效果:將本產(chǎn)品15μL與用戶自備的模板,引物和水共15μL混合后,直接進(jìn)行PCR反應(yīng)(PCR參數(shù)由用戶自己確定),反應(yīng)結(jié)束后直接取10μL電泳檢查擴(kuò)增結(jié)果。
二、組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)。
2、標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200U/L,100U/L,50U/L,25U/L,12.5U/L,6.25U/L,3.12U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔0U/L。如配制100U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、樣品稀釋液:1×20ml。
4、檢測稀釋液A:1×10ml。
5、檢測稀釋液B:1×10ml。
三、使用及效果:
PCR反應(yīng)特點(diǎn):
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
?、趬A基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
?、馨谢虻奶禺愋耘c保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。